Регенеративная медицина

Экскурс в историю

С давних времен люди мечтали победить старость и вернуть себе молодость. В «Метаморфозах» древнеримского поэта Овидия было описано, как мифическая колхидская царевна-волшебница Медея омолодила Эсона престарелого отца ее мужа. Усыпив старика травами она перерезала ему горло и выпустила его старую кровь, а затем влила в его тело волшебное зелье. «И — о, чудо! — волосы старика прежде белые, как снег, потемнели, пропали морщины и старческая худоба, на щеках вновь заиграл румянец. Проснулся Эсон и вновь увидал себя молодым, сильным и бодрым».

Поиски средства от старения, заложившие основы современной биогеронтологии начались, наверное, ещё в 1889 году, когда 72 летний французский ученый Броун-Секар сообщил о положительных результатах проведенного им на себе эксперимента. Он обнаружил, что подкожное впрыскивание человеку водного настоя свежих яичек морских свинок и собак приводит к увеличению общей мышечной силы и усилению умственной деятельности. Позднее правда выяснилось, что за периодом усиления физиологической деятельности, вызванной этим препаратом, названным эликсиром молодости Броун-Секара, наступает период упадка. Тем не менее, открытие Броун-Секара вдохновило многих исследователей на поиски путей омоложения.

Более 100 лет тому назад выходец из России, ставший впоследствии знаменитым благодаря разработанному им способу возвращения молодости путем трансплантации семенных желез Серж Воронофф (Сергей (Самуил) Воронов), наблюдая за кастратами евнухами, обнаружил, что у этих несчастных очень рано появлялись присущие старикам признаки старения и умирали они значительно раньше. Это привело его к мысли продлить состояние молодости с помощью трансплантации в старый организм молодых половых желез. Опыты на животных показали ошеломляющие результаты – старые козлы, овцы и быки начинали резвиться как молодые и спариваться. Вдохновлённый этими опытами, он приступил к омоложению пациентов. Операция заключалась в добавлении к человеческим яичкам тонкого среза взятого из яичек молодой обезьяны (среди людей доноров готовых расстаться со своими половыми железами, даже за крупное вознаграждение, было очень мало). Пересадки стоили громадных денег, но желающих омолодиться это не смущало. За короткий срок Воронов стал сказочно богат. В написанных Вороновым книгах, таких как «Омоложение прививанием» он хвастался, что его операции увеличивают у пожилых сексуальное влечение, слух, память, зрение, а также повышают физическую выносливость и работоспособность. Тем не менее, пациенты Воронова отнюдь не отличались долгожительством. Да и сам он, по воле случая, дожил только до 85 лет, успев правда жениться в 70 лет на красавице, которая была на 49 лет моложе его.

Идеи Воронова и Броун-Секара об омоложении путем гормональной стимуляции используются врачами-геронтологами и в наше время.

Родоначальником современных подходов к продлению жизни путём трансплантации следует считать ещё одного исследователя. В начале 1930 х годов швейцарский врач Поль Ниханс разработал способ борьбы со старостью с помощью клеточной терапии. Он использовал клетки, полученные из эмбриональных тканей овец. Введение таких клеток в стареющий организм активировало в нем процессы регенерации. Разумеется, клетки животных не способны встроиться в организм пациента, однако они снабжают его гуморальными факторами, способствующими оздоровлению, и активируют его иммунную систему. Эта терапия, которую практикуют в Германии и Швейцарии и по сей день, связана с определенным риском заразиться от животных некоторыми инфекционными заболеваниями. Но туристов со всего мира это не останавливает.

Доказательства обратимости старения. Перепрограммирование соматических клеток. Получение ИПСК.

Следующим важным шагом на пути к методам омоложения, теперь уже радикальным, стали опыты Бриггса и Кинга, которые в 1952 году пересадили ядро из клеток эмбриона в лишенную ядра яйцеклетку лягушки Rana pipiens и сумели получить нормальных плавающих головастиков.

Таким образом было получено первое доказательство того, что ядро дифференцированной клетки может быть использовано вместо ядра нормально оплодотворенных яиц, а следовательно процессы развития на клеточном уровне обратимы, их можно повернуть вспять.

Следует отметить, что еще в 1948 году российским эмбриологом Г. В. Лопашовым был разработан метод пересадки (трансплантации) ядер в яйцеклетку тритона. Однако его статья, отправленная в «Журнал общей биологии», так и не была опубликована из-за гонений на генетиков.

В 1962 году Джону Гёрдону впервые удалось пересадить ядро, взятое из эпителиальных клеток кишечника головастиков Шпорцевой лягушки, то есть из полностью дифференцированных клеток, и получить из них взрослое животное. Таким образом, было доказано, что в ядре эпителиальной клетки есть вся необходимая информация для образования всех клеток взрослого организма. Вместе с тем, для того чтобы получить все эти клетки, ядро эпителиальной клетки необходимо сперва омолодить перепрограммированием обратно в «эмбриональное» состояние, а сделать это может цитоплазма яйцеклетки, активируя в нём генетическую программу, необходимую для эмбрионального развития.

Рис. 1. А. Схема метода перепрограммирования соматических клеток путём переноса ядер соматических клеток (Somatic cell nuclear transfer — SCNT) в ооциты-реципиенты; Б. Клон самцов альбиносов лягушки полученный путем пересадки ядра из клеток эмбриона лягушек альбиносов в энуклеированные яйца самки дикого типа (не являющейся альбиносом) . Слайд в свободном доступе [[1]].

Развитие этого метода пересадки ядра из взрослых соматических клеток в яйцеклетку с удаленным или инактивированным ядром, названного SCNT (somatic cell nuclear transfer), позволило клонировать животных (всем известен триумфальный опыт с овечкой Долли), а также получать индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (сокращенно ИПСК) [[2]]. Но, что, пожалуй, самое главное, этот метод заложил основу для так называемого терапевтического клонирования, которое позволит в ближайшем будущем не только излечивать такие ранее неподдающиеся лечению дегенеративные заболевания как амилотрофический склероз или Болезнь Паркинсона, но и лечить от старости.

Важно отметить, что для перепрограммирования методом SCNT используется натуральный природный механизм, а не вирусные векторы или химические препараты.

На основе этого метода был создан препарат BQ-A, который по утверждению его авторов позволяет в 1.7 раза продлить жизнь мышкам (что при пересчете на среднюю продолжительность человека в 72 года означало бы повышение средней продолжительности жизни до 122 лет) и в 2.2 раза жизнь плодовым мушкам – дрозофилам.

К сожалению, метод пересадки ядер на сегодняшний день не может использоваться в широкой медицинской практике, так как процедура трансплантации ядер очень трудоемкая и ненадёжная, а необходимые для её использования яйцеклетки можно получить только от доноров (впрочем, в 2016 году ооциты удалось получить из клеток кожи, правда пока только мыши [[3]]).

Тем не менее, в 2006 году японским исследователям Такахаши и Яманака удалось найти способ обходиться для омоложения без яйцеклеток. С помощью разработанной ими системы селекции удалось отобрать из числа 92 белков, синтез которых возрастал на начальных стадиях эмбриогенеза, те факторы, которые позволяют воспроизвести процесс омоложения соматической клетки без участия яйцеклетки, вместо которой они использовали ретровирусы, каждый из которых нес уникальную кольцевую ДНК кодирующую тот или иной фактор [[4]]. Поочередным исключением одного из кандидатов удалось сначала сократить список этих факторов до 10, а затем до всего четырех: Oct3/4, Sox2, c-Myc и Klf4, впоследствии названных факторами Яманаки.

К числу подобных факторов сейчас относят также Nanog – белок, образующий димеры, необходимые для блокировки дифференцировки плюрипотентных клеток, Lin28 участвующий в регуляции микро РНК let-7, её мишень — белок Nr6a1, а также Sall4, поскольку именно комплекс Oct4-Sox2-Sall4 действует на клетку подобно ластику, удаляющему весь предыдущий опыт клетки [[5]], а значит и «записи» о старении. Оооциты млекопитающих также содержат особый линкерный гистон H1foo, способствующий перепрограммированию и получению более качественных ИПСК, «разрыхляя» хроматин и таким образом делая его более доступным для транскрипции [[6]]. За доказательство того факта, что взрослые дифференцированные клетки могут быть возвращены обратно в состояние, когда из них снова, причем неоднократно, можно получить полноценный взрослый организм с нормальной продолжительностью жизни [[7]], Джон Гёрдон и Синья Яманаки в 2012 году получили Нобелевскую премию.

В результате перепрограммирования в ИПСК возвращаются к показателям эмбриональной ткани все маркеры старения [[8] [9] ]: восстанавливается длина теломеров [[10]], профиль метилирования ДНК и гистонов [[11]], резко снижается уровень p16^INK4A и p21^CIP1. Омолаживаются и митохондрии клетки [[12] [13]] при этом восстанавливается количество митохондрий, их морфология и клеточный метаболизм [[14] [15]], подавляются связанные со старением пути митохондриального окислительного стресса [[16] [17]], за счет чего восстанавливается характерный для молодых клеток уровень дыхания, хотя при этом остаются некоторые из накопленных за время жизни мутаций в митохондриальной ДНК [[18]]. Причем, что самое главное — показатели омоложения сохраняются и в полученных из ИПСК соматических клетках [[19]].

Доказано что ИПСК могут быть получены путем омоложения клеток даже от столетних людей [[20]]. Поэтому ИПСК, которые можно неограниченно размножать культивированием, могут стать удобным источником омоложенных клеток для клеточной терапии и различных способов получения миниатюрных органов – органоидов.

В отличие от перепрограммирования до ИПСК, при других способах перепрограммирования – при, так называемом, прямом перепрограммировании и трансдифференцировке омоложения клеток не происходит [[21]], поэтому мы их здесь не рассматриваем.

Клеточные технологии на основе ИПСК – источник возможностей омоложения.

Мы не будем здесь рассматривать те случаи, когда из-за генетических нарушений происходит преждевременное старение – прогерия. Хотя пациенты с прогерией обычно умирают от болезней характерных для пожилых людей (инсульта, инфаркта миокарда, злокачественных новообразований) [[22]], технология перепрограммирования в ИПСК не позволяет лечить эти болезни, так как хотя полученные в этом случае ИПСК и становятся вновь молодыми [[23]], полученные из них соматические клетки очень быстро вновь становятся старыми [[24] [25]]. Помочь в этом случае смогут фармакологические препараты вроде JH4 (при старении, вызванном прогерином [[26]]) или такие ингибиторы фарнезилтрансферразы (farnesyltransferase) как ABT-100 (при старении вызванном преламином А [[27]]), а также методы генной терапии.

Широкому внедрению способов омоложения с помощью тканей и органов, полученных из ИПСК, препятствует трудоемкость их получения [[28]]. По словам Синья Яманаки для того, чтобы сделать клеточную линию ИПСК удовлетворяющую стандартам необходимым для её использования в клинике, требуется два года работы группы из 50 человек. В то же время подобрать подходящие готовые ИПСК, которые не будут отторгнуты организмом пациента, также сложно, как найти орган для трансплантации. Поэтому в Японии и США, чтобы удешевить и ускорить использование ИПСК для клеточной терапии и выращивания органов для трансплантации, создаются банки ИПСК, взятых от универсальных доноров, которые гомозиготны по антигенам тканевой совместимости человека HLA (Human Leukocyte Antigens). Это как группы крови. Люди с группой 0(I)Rh- считаются «универсальными донорами», и их кровь может быть перелита почти любому за редким исключением. Подсчитано что ИПСК полученных от 200-250 универсальных доноров достаточно, чтобы обеспечить совместимым материалом для трансплантации 95% населения США. В отличие от крови, однажды полученную линию ИПСК можно поддерживать и размножать неопределённо долго – они остаются молодыми.

Альтернативой банкам ИПСК является создание универсально совместимых ИПСК, однако их использование сопряжено с серьёзным риском болезней от вирусных инфекций и опухолей, перед которыми организм, в этом случае становится бессилен [[29]].

К счастью не все ткани организма обязательно должны быть подобраны по соответствию донора и пациента, для того чтобы избежать иммунного ответа, приводящего к отторжению трансплантата.

Приятным исключением является хрящевая ткань. Она состоит из хондроцитов и внеклеточного матрикса. При пересадке внеклеточный матрикс защищает хондроциты от иммунных клеток хозяина, предотвращая тем самым иммунный ответ. Кроме того, на клеточной поверхности хондроцитов мало антигенов HLA, которые ответственны за запуск иммунной реакции. Поэтому для выращивания хрящей необходимых для трансплантации пациентам можно использовать любой человеческий источник ИПСК [[30]].

ИПСК — неиссякаемый источник для получения омоложенных ММСК

Одним из важнейших условий функционирования человеческого организма и поддержания его здоровья является постоянное обновление тканей и органов в котором участвуют взрослые стволовые клетки и в том числе мультипотентные мезенхимальные стволовые клетки (ММСК). С возрастом всё больше этих клеток утрачивает свою способность поддерживать регенерацию, что связано с изменениями в активности более 5000 генов [[31]].

Большинство заболеваний, характерных для пожилых людей, таких как анемия (недостаточное производство эритроцитов), саркопения (потеря мышечной массы), и остеопороз (снижение плотности и прочности костей), имеют в своей основе дисбаланс между потерей клеток и их обновлением. Первопричиной такого дисбаланса главным образом является понижение в процессе старения числа и качества стволовых клеток [[32]].

Поэтому важнейшим подходом к омоложению организма является восстановление или хотя бы регулярное возмещение численности этих клеток в организме.

Для восполнения стволовых клеток и реабилитации процессов регенерации, пожилым пациентам требуются различные виды клеточной терапии [[33]]. Есть, к примеру, свидетельства того, что по сравнению с людьми, получившими стандартное лечение хронической ишемической болезни сердца и сердечной недостаточности, получатели терапии стволовыми клетками с меньшей вероятностью снова попадают в больницу или умирают в течение года или более после лечения [[34] [35]].

 Фактором, сдерживающим развитие методов клеточной терапии, являлась сложность и болезненность процедур по выделению стволовых клеток из человеческого организма и отсутствие качественных методов их размножения культивированием.

Между тем для производства мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток (ММСК), поскольку они являются иммунопривилегированными клетками [[36]], можно использовать любой человеческий источник ИПСК. Особенно если предполагается использовать ММСК для лечения паракринными факторами, которые они секретируют, а сами ММСК вводить в виде инкапсулированных клеток, защищённых от иммунной системы организма оболочкой [[37] [38]], которая к тому же способна создать благоприятную искусственную нишу (микроокружение) способную подпитывать клетки и стимулировать их активность [[39] [40]].

Воздействием на ИПСК человека препаратом SB431542 (ингибитор TGFB (Transforming growth factor beta)) можно достаточно быстро получить однородную культуру индуцированных мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток (иММСК), которые по свойствам мало чем отличаются от молодых ММСК [[41]]. Есть правда сведения о том, что омоложенные иММСК, по сравнению с изначально молодыми ММСК, иногда утрачивают способность подавлять пролиферацию Т-клеток [[42]]. Это очевидно связано с источником получения ИПСК, так как иММСК, полученные из ткани дёсен, обладали мощными иммуносупрессивными свойствами, демонстрируя способность подавлять Т-клетки эффекторных клеток, популяции Th1 / Th2 / Th17, а также повышенные уровни клеток Treg [[43]]. По сравнению с ММСК полученными от людей среднего и пожилого возраста, иММСК демонстрируют превосходную способность стимулировать заживление ран и проангиогенные свойства (способствовать развитию сети сосудистых капилляров). Поэтому использование ИПСК для получения иММСК открывает возможность широко использовать методы клеточной терапии для лечения различных болезней старческого возраста [[44] [45]]. К примеру, полученные из ИПСК и модифицированные невирусной трансфекцией для гиперэкспрессии гена BMP6 человеческие иММСК способны более эффективно, чем ММСК полученные из костного мозга человека регенерировать не сраставшиеся костные дефекты у мышей [[46]]. Пригодятся иММСК и для терапии при ишемическом инсульте, поскольку в доклинических испытаниях на моделях инсульта они оказывали нейропротекторное действие, способствовали регенерации, развитию кровеносных сосудов, снижали воспаление [[47]]. Помогут и для борьбы с фиброзом печени [[48]], а также с такими болезнями старческого возраста как остеопороз и остеоартрит [[49]].

Помимо методов получения иММСК разработаны и методы получения других клеток [[50]]. Наиболее важными из них являются методы получения из ИПСК эндотелиальных клеток [[51] [52]]. Их можно будет использовать для лечения таких возрастных заболеваний как ишемическая ретинопатия [[53]], инсульт [[54]], регенерации сосудов для лечения ишемии конечностей, диабетической ангиопатии и нефропатии [[55]]. Кроме того, с их помощью можно будет выращивать органоиды, обладающие кровеносной сетью, а значит более пригодные для трансплантации [[56]].

иММСК — «фабрика» по производству омолаживающих факторов и экзосом

Было неоднократно показано, что терапевтическая эффективность мезенхимальных стволовых клеток обычно опосредована не их дифференцировкой и включением в ткань мишень, а секретируемыми ими трофическими факторами.

Поэтому еще одно перспективное направление использования иММСК — это производство омолаживающих факторов. Известно, что молодые клетки ММСК способны продлить жизнь старым животным [[57]]. Японскими исследователями был идентифицирован фактор, стимулирующий регенерацию тканей. Этот фактор известный как Gdf6 (growth differentiation factor 6) секретируют молодые ММСК. Но с возрастом синтез этого фактора падает, что связано со снижением синтеза микроРНК-17 [[58]]. Гиперэкспрессия Gdf6 in vivo смягчала такие проявления патологий, связанных со старением как снижение лимфопоэза, недостаточная репарация мышц, снижение количества нервных клеток-предшественников в головном мозге и хроническое воспаление [[59]].

Ещё одним фактором терапевтического воздействия ММСК являются внеклеточные везикулы — крошечные внеклеточные пузырьки, которые выделяют клетки различных тканей и органов в окружающую их среду [[60]].

Внеклеточные везикулы, в том числе экзосомы и эктосомы, играют важнейшую роль в механизмах межклеточного общения и взаимной координации тканей, в том числе и в процессах старения [[61]]. Биологическая и терапевтическая активность, а также способность к секреции экзосом мезенхимальных стволовых клеток обратно коррелируют со стадией развития донора [[62]]. В обзоре Ден Сюй и Хидетоши Тахара [[63]] обоснована гипотеза о том, что, некоторые из переносимых ими микроРНК могут способствовать старению, запуская сигнальные пути, ведущие к одряхлению организма, другие наоборот защищают от этих процессов. Внеклеточные везикулы из состарившихся клеток с помощью своей микроРНК так изменяют микроокружение, что оно начинает благоприятствовать возрастным заболеваниям, понижению иммунитета, воспалению и нарушению функций различных органов. Экзосомы из молодых клеток наоборот способствуют процессам регенерации различных органов и уже взяты на вооружение для неклеточной терапии [[64]]. Важно также отметить, что экзосомы не содержат антигены тканевой совместимости, поэтому даже при применении экзосом от одних млекопитающих для лечения млекопитающих другого вида, обычно не наблюдается сильных иммунных реакций [[65]]. Это открывает широкие возможности для лечения от старости путем использования экзосом, полученных скажем от молодого слона, кита или гренландской полярной акулы. Кроме того, в отличие от клеток, экзосомы не могут сами размножаться и поэтому не могут выйти из-под контроля, не могут образовывать опухоли, а значит терапия экзосомами более безопасна, чем клеточная терапия. Благодаря липидной оболочке экзосомы предохраняют свое содержимое от разбавления и разрушения, что особенно важно, если лекарством является фермент или нуклеиновая кислота. Благодаря рецепторам на их поверхности они избирательно находят клетки-мишени, тем самым повышая эффективность переноса лекарственных препаратов, белков и РНК и снижая возможность побочных эффектов. Их можно использовать для перепрограммирования клеток организма in vivo, особенно в тех случаях, когда используется большая генно-инженерная конструкция, не вмещающаяся в оболочку вируса [[66]].

Далеко не полный список возможного терапевтического применения экзосом уже включает иммунотерапию, изготовление вакцин, модуляторы ангиогенеза, целевую доставку в ткани-мишени различных лекарственных препаратов (в том числе «скоропортящихся»: ферментов, препаратов на основе РНК: микроРНК, матричных РНК, малых интерферирующих РНК [[67] [68] [69] [70] [71] [72]]). Поэтому они безусловный кандидат на поставку в клетки организма омолаживающих микроРНК, способных инактивировать процессы старения, связываясь с теми длинными некодирующими РНК, которые подавляют активность генов регенерации, а также связываясь с 3 ‘нетранслируемым участком (UTR) мРНК определенных генов, могут предотвратить трансляцию синтеза определенных белков [[73] [74] [75]]. Возможно, что удаляя из кровотока старого организма экзосомы и заменяя их на экзосомы молодого растущего организма, можно будет перепрограммировать клетки, так что они станут моложе?

Разработана уникальная технология Exo-Fect™ позволяющая с помощью экзосом переносить РНК в клетки мишени. Более того с помощью технологии XMIR™ можно заставить культуру клеток избирательно производить и упаковывать в секретируемые экзосомы выбранные исследователем определенные микроРНК. Система XMIR™, разработанная фирмой SBI, использует уникальную последовательность «XMotif», которая будучи присоединена к какой-либо микроРНК или анти-микроРНК, заставляет инфицированную ею клетку транспортировать и упаковывать эту РНК в экзосому

Комбинация технологий Exo-Fect™ и XMIR™ позволяет превратить культуру клеток в фабрику по производству лечебных экзосом. Такую «фабрику» можно культивировать in vitro, а можно доставить прямо в организм в виде инкапсулированных иММСК и использовать in vivo. По материалам http://www.genetimes.com.cn/news/showother.aspx?Did=73203285154070528 В тех случаях когда нет возможности культивировать клетки, но есть выделенные экзосомы, микроРНК можно загрузить прямо в экзосомы, используя модифицированный метод трансфекции с хлоридом кальция, вместо того, чтобы инфицировать ими клетки [[76]].

«Выращивание» крови

Ещё один путь использования ИПСК — это производство молодой крови для трансфузии.

Известно, что даже одноразовое переливание молодым мышкам крови от старых животных приводит к тому, что у них быстро снижается нейрогенез в гиппокампе, а также наблюдаются некоторые другие дегенеративные изменения и активация воспалительных процессов [[77]]. Это свидетельствует о том, что в старой крови присутствуют факторы, способствующие старению, тогда как молодая кровь омолаживающее действует на мозг (см. рис ниже). Известно также, что терапия с использованием обогащенной тромбоцитами плазмы крови от молодых доноров позволяет восстановить менструальный цикл у женщин, у которых до этого не было месячных уже в течение пяти лет [[78]]. Помогали внутрисуставные инъекции обогащенной тромбоцитами плазмы лечить также остеоартрит коленного сустава. Но только если пациенты были не старше 80 лет [[79]].

Предполагается использовать плазму крови от молодых доноров и для лечения такого старческого недуга как болезнь Альцгеймера [[80]].

 Зная, какие белковые факторы способствуют омоложению организма, можно организовать их производство с помощью клеточных культур CAP-Go фирмы CEVEC, которые легко размножаются и способны продуцировать рекомбинантные гликозилированные белки плазмы крови [[81]]. Вместе с тем, зная какие факторы старой крови вызывают старение у молодых, можно разработать способы очистки крови от этих неблагоприятных факторов.

Например, от таких токсичных белков как хемокин CCL11(C–C motif chemokine 11), также известный как эотаксин [[82]]. Уровень этого белка в плазме крови коррелирует со снижением нейрогенеза у старых мышей. Повышение уровня CCL11 у молодых мышей in vivo ведет к снижению нейрогенеза и нарушениям памяти, а также способности к обучению. Увеличен уровень хемокина CCL11 и в плазме крови и спинномозговой жидкости у пожилых людей [ [83]]. Кроме того, этот хемокин – аттрактант избирательно привлекающий эозинофилы, участвует в механизмах развития таких эозинофильных воспалительных заболеваний как атопический дерматит, аллергический ринит, астма и паразитарные инфекции. Некоторые изоформы этого белка являются фактором риска ишемического и гемморагического инсульта [[84]].

Очистить кровь от подобных токсинов может помочь проточный магнитный сепаратор и покрытые моноклональными антителами магнитые микрошарики [[85]].

Омоложение мозга старого животного молодой плазмой крови, обогащенной тромбоцитами [[86]]

Следует однако заметить, что вышеописанные технологии получения омолаживающих факторов культивированием клеточных культур и получения омолаживающих факторов культивированием клеточных культур и получение моноклональных антител, используемых для очистки крови с помощью сепаратора, очень дорогостоящее занятие. Поэтому куда дешевле использовать молодую донорскую кровь. Только вот где взять столько доноров, согласных поделиться своей кровью?

Острая нехватка донорской крови побуждает исследователей искать альтернативную замену.

В будущем одним из источников молодой человеческой донорской крови может стать кровь человека, выращенная в организме крупного одомашненного животного, такого как слон, верблюд, корова, лошадь или свинья. Пока для опытов по выращиванию человеческой крови используют гуманизированных мышей с функциональной иммунной системой человека. Для получения гуманизированных мышей лабораторным мышкам линии с иммунодефицитом трансплантируют ткань человеческого тимуса, а также гемопоэтические стволовые клетки, взятые от одного и того же донора. Кроме того, для достижения оптимального приживления трансплантированных человеческих кроветворных стволовых клеток этим мышкам дополнительно внедряют природную мутацию рецептора Kit, в результате которой они теряют способность производить собственные предшественники гемопоэтических стволовых клеток [[87] [88]].

Опыты с гуманизированными мышками линии NSGW41 показали, что эритро-мегакариоцитарные клетки человека хорошо приживаются в организме этих мышей; факторы роста, ответственные за пути дифференциации человеческих клеток, совместимы между видами и позволяют достичь in vivo полного созревания тромбоцитов человека, а также получить содержащие ядро клетки-предшественники человеческих эритроцитов. В крови животного, однако, эти клетки не накапливались, поскольку их тут же уничтожали макрофаги [[89]]. Очевидно, необходимо модифицировать и макрофаги. Аналогичные эксперименты вскоре можно будет воспроизвести на мутантных поросятах, у которых либо нет тимуса, либо он не развит [[90]]. C мутантными поросятами, однако сложность в том, что они в случае иммунодефицита, теряют способность к воспроизводству потомства и крайне подвержены вирусным инфекциям, которые трудно лечить. Одна надежда на слонов, но их пока никто не исследует на предмет модификации их иммунной системы для «гуманизации» и толерантности к клеткам человека – слишком дорогой объект для опытов, пусть и жизненно необходимых человечеству.

Упростить трансплантацию человеческих гемопоэтических клеток может новый способ «расчистки» ниши для этих клеток в организме животного. Оказалось, что если продержать животное 1-2 недели на диете без незаменимой аминокислоты – валина, то его гемопоэтические клетки гибнут, высвобождая место для человеческих гемопоэтических клеток [[91]].

Создание новых органов – альтернатива использованию донорских.

Удлинение продолжительности жизни людей в развитых странах привело к увеличению количества пациентов, страдающих от хронических заболеваний и недостаточности органов в терминальной стадии. Единственным способом вылечить больного с полностью изношенным органом является его замена. Кроме того, нередко отказ органа наблюдается также и у новорожденных детей.

К сожалению, острый дефицит донорских органов существенно ограничивают возможности излечения многих больных (далеко не все пациенты доживают до операции по трансплантации. Этот дефицит также порождает множество этических и даже криминальных проблем: разрешение на изъятие органа и оплата его стоимости; трансплантологический туризм в страны, где люди вынуждены или их принуждают продать свой орган; траффикинг органов (продажа людей с целью изъятия человеческих органов).

Выращивание органов из клеток универсальных доноров или, что ещё лучше, из клеток самих пациентов позволило бы избавиться от проблем поиска доноров и опасности отторжения чужеродного органа, а также позволило бы успешно лечить функциональные расстройства и многие болезни, вызванные старческим дряхлением [[92] [93]].

Какие подходы сегодня существуют для преодоления дефицита органов для трансплантации?

Есть четыре основных пути преодоления нехватки органов с помощью биоинженерии [[94] [95]]:

1. Биопринтинг (3D печать) органов и тканей;
2. Рецеллюларизация (т.е. посев) новых клеток на очищенный от клеток донора межклеточный матрикс органов и тканей;
3. Репарация клеток и регенерация тканей;
4. Ксенотрансплантация.

Биопринтинг (3D печать) органов и тканей

Биопринтинг или 3D печать органов и тканей представляет собой процесс, при котором клетки и межклеточная среда наноятся послойно в виде биочернил [[96]], также как пластмассы в 3D печати [[97]]. Цель биопринтинга — создание функционирующей ткани или органа. Эту живую конструкцию предполагается затем имплантировать пациенту, с тем, чтобы заменить утраченные функциональные возможности изношенного или повреждённого органа.

Несмотря на кажущуюся простоту решения задачи воссоздания органа, эта технология пока не преодолела ряд трудностей:

1. как заставить клетки в напечатанных тканях действовать коллективно, как единый «оркестр», а не вразброд;
2. как руководить развитием органа с помощью межклеточной матрицы [[98]];
3. как создать функциональные сосудистые сети и интерактивную микросреду (нишу) [[99]].

Главное требование, чтобы орган исправно на протяжении многих лет выполнял свои функции.

В настоящее время созданы технологии, позволяющие успешно напечатать такие разные ткани как кости нижней челюсти и свода черепа, всевозможные хрящи (носа, уха и т.д.) и даже скелетные мышцы [[100]]. Безусловным достижением, вселяющим надежды, является биоинженерная конструкция уретры, которая работает у 5 больных уже свыше 6 лет.

Рецеллюларизация (посев) новых клеток на очищенный от клеток донора межклеточный матрикс органов и тканей

С какой бы точностью не воспроизводил биопринтинг структуры органов, ему все равно пока далеко по разрешению и составу внеклеточного матрикса до тех подложек которые можно получить из естественных, но лишенных клеток донора (децеллюларизованных) тканей и органов. Во время децеллюларизации, наряду с удалением клеток и некоторых других компонентов ткани, которые могут вызывать иммунную реакцию, тем не менее стараются сохранить трехмерную архитектуру органа и микро-сосудистую сеть, необходимую в дальнейшем для снабжения кислородом и питания новых клеток (теперь уже клеток пациента, а не донора), которые будут посеяны при рецеллюларизации.

 Технологии децеллюларизации позволяют получить внеклеточный матрикс, содержащий такие ростовые факторы как: васкулярный эндотелиальный ростовой фактор (VEGF), необходимый для роста сосудов; основной ростовой фактор фибробластов (bFGF), также необходимый для роста сосудов и процессов регенерации; трансформирующий ростовой фактор, бета (TGF-β), контролирующий множество различных процессов, таких как секреция нового матрикса, пролиферация, дифференциация и т.д. Помимо вышеперечисленных факторов есть ещё множество других менее изученных молекул.

К сожалению, децеллюларизация, как показано масс-спектрометрией, все же ведет к потере некоторых компонентов внеклеточного матрикса и связанных с ним факторов роста [[101]].

Основная роль природных подложек не в том, чтобы создать должные биомеханические структуры (с этим прекрасно справляется и биопринтинг), а в том, чтобы создать посеянным при рецеллюларизации клеткам реципиента условия для наиболее соответствующего для данной ткани характера роста [[102]].

Описаны примеры изготовления на базе децеллюларизованной природной подложки искусственной печени, легких, искусственной поджелудочной железы и даже сердца, способного ритмически сокращаться [[103]]. Тем не менее рецеллюларизация — это длительный и дорогостоящий процесс, для которого необходимо правильно подбирать клетки для восстановления паренхимы, клетки для восстановления сосудов, способы их посева и методики инкубации и восстановления функций [[104] [105]]. Пока, к сожалению, ни одного случая полного восстановления функций комплексных органов, таких как сердце, почки, печень не наблюдалось.

Основными проблемами, которые необходимо решить для использования децеллюларизованных органов полученных от животных (овец, коз, свиней) для посева на них клеток человека являются:

1. Неизвестно насколько соответствуют белки межклеточного матрикса животных запросам человеческих клеток, не вызовет ли такой матрикс оттожение из-за иммунной реакции;
2. Нет ли инфекций, которые могут передаваться человеку от животных при таком использовании; и самое главное насколько функциональным будет орган после рецеллюларизации, будет ли он достаточно качественным, чтобы подсадить его пациенту.

Иногда нет необходимости использовать в качестве матрикса цельную ткань. Для восстановления костей и хрящей вполне подходит фрагментированная ткань. А чтобы её способность стимулировать заживление переломов или поврежденных хрящей была как можно выше, клетки не удаляют, а только делают безжизненными. Такой матрикс, обладающий повышенными способностями активировать образование хондроцитов и механически более стойкий, используют для восстановления хрящей – ткани, которая обладает низкой имунногенностью [[106]], а при очистке от клеточного материала и для стимуляции процессов регенерации мышц [[107]].

Репарация клеток и регенерация тканей

Некоторые, так называемые «бессмертные» животные вроде гидры и вегетативных форм планарии обладают удивительной способностью восстанавливать утраченные части тела. Что самое главное, после такого восстановления утраченных частей тела, весь организм, включая и неповрежденные участки тела животного, перестраивается и омолаживается. Иначе работает механизм омоложения у некоторых медуз (Turritopsis dohrnii), которые способны достигнув старости, осуществить трансдифференцировку своих клеток в более молодые [[108]]. Как, каким путем достигается это омоложение пока не ясно. Жуки кожееды также при голодании способны переходить к более молодым фазам развития [[109]]. Ещё более впечатляющее долголетие наблюдается у растений, размножающихся вегетативным клонированием. Так, например, ель «Старый Тикко» достигла возраста в 9550 лет. Каким образом подобные организмы регулярно удаляют мутации в ДНК их генома и в ДНК их митохондрий без участия полового процесса, остается загадкой. Например, матка (царица) у муравьёв Lasius niger живет до 29 лет, тогда как имеющие тот же геном рабочие живут только до одного или двух лет, причём даже в лабораторных условиях. Связано это с процессами репарации, которые идут значительно интенсивнее у маток, но не у рабочих [[110]].

Знание механизмов регенерации и механизмов, регулирующих гены, связанные с этими процессами, могло бы помочь при создании технологий радикального продления жизни.

Говоря о возможностях воздействия на процессы регенерации тканей нельзя не упомянуть о возможностях терапевтического использования технологии прямого репрограммирования in vivo. Так, например, при фиброзе печени образуется рубцовая ткань, состоящая из миофибробластов, которая замещает гепатоциты, что приводит к функциональной недостаточности печени [[111]]. До настоящего времени единственным способом излечения от этого смертельного заболевания была пересадка печени. Технология прямого перепрограммирования in vivo дает надежду, что этих больных можно будет спасать и без пересадки печени. Rezvani с соавторами [[112]], а также Song с соавторами [[113]] описали способы получения индуцированных гепатоцитов из фибробластов рубцовой соединительной ткани непосредственно в печени мышки. Для этого Song с соавт. использовали перенесенный аденовирусом вектор с транскрипционными факторами FOXA3, GATA4, HNF1A, и HNF4A. По утверждению авторов исследования, это позволило значительно снизить фиброз печени. Развитие этого метода может помочь в будущем лечить без пересадки такие неизлечимые заболевания печени как цирроз [[114]].

Достижения современной медицины нередко позволяют сохранить жизнь людям и пережить инфаркт миокарда. Однако эта болезнь приводит к инвалидности человека, поскольку через 1-2 недели после инфаркта некротический участок начинает замещаться рубцовой тканью и развивается сердечная недостаточность вследствие необратимой потери функциональных кардиомиоцитов. Большие перспективы в качестве новой терапии для лечения сердечной недостаточности сулит метод прямого перепрограммирования in vivo фибробластов рубцовой ткани в индуцированные кардиомиоциты (иКМЦ). В опытах на модели острого инфаркта миокарда у мышек, доставка ретровирусом вектора, кодирующего три фактора транскрипции, Gata4, Mef2c и Tbx5 превращала эндогенные фибробласты сердца в функциональные иКМЦ. Эти иКМЦ были электрически и механически интегрированы в ткани миокарда, и способствовали уменьшению размера рубца и улучшению функции сердца. К сожалению, эффективность этой технологии пока ещё недостаточно высока чтобы уже начать её применение в клинике [[115]]. Кроме того попытки применить этот метод для получения человеческих кардиомиоцитов оказались безуспешными.

Новые возможности для регенеративной терапии сердечной мышцы сулит метод без использования каких-либо генетических манипуляций, разработанный китайскими исследователями. Они идентифицировали комбинацию из девяти небольших молекул, которые могут эпигенетически перепрограммировать фибробласты человека в химически индуцированные кардиомиоциты (хиКМЦ). При трансплантации фибробластов человека, обработанных коктейлем из этих молекул, в пораженное инфарктом сердце мыши они ритмично сокращались и напоминали человеческие кардиомиоциты [[116]]. Важную роль в процессе перепрограммирования играл ингибитор H3K4 метилтрансферазы Mll1, называемый MM408. Обработка клеток MM408 значительно повышала биения хиКМЦ [[117]]. Этот препарат, действующий на эпигеном, может помочь и при перепрограммировании других клеток.

Чешским исследователям с помощью транскрипционного фактора MafA и матричных РНК, кодирующих транскрипционные факторы Pdx1 и Ngn3 удалось превратить экзокринные панкреатические клетки в инсулин-продуцирующие клетки. Причем предварительная обработка клеток ингибитором метилирования ДНК 5-аза-2′-дезоксицитидином дополнительно повышала образование инсулин-продуцирующих клеток с 3,5 ± 0,9 до 14,3 ± 1,9%. Кроме того, 5-аза-2′-дезоксицитидин повышал способность этих клеток к секреции инсулина в ответ на нагрузку глюкозой [[118]].

Альтернативный и более эффективный способ получения зрелых, функциональных и клинически значимых бета-клеток из экзокринной части поджелудочной железы человека основан на гиперэкспресси экзогенного транскрипционного фактора Pax4 и ингибировании экспрессии эндогенного транскрипционного фактора ARX (Aristaless related homeobox). Важно отметить, что эти бета-клетки, при трансплантации мышкам с экспериментальным диабетом секретировали в кровоток инсулин и смогли нормализовать уровень глюкозы в крови [[119]]. Развитие подобных методов может помочь борьбе с диабетом.

К сожалению, пока нет методов, которые бы позволяли перепрограммировать соматические клетки in vivo в более молодые, но не плюрипотентные соматические клетки. Изучение механизмов омоложения старых клеток у планарий и у гидры (в неповрежденной части тела) после регенерации могло бы помочь. К сожалению, подобный механизм не задействован у млекопитающих и успешное продление жизни мышей с помощью сенолитиков связано только с удалением источников SASP (senescence-associated secretory phenotype) [[120]], но не с активацией процессов регенерации, активность которых наоборот падает [[121]] из-за того, что понижается способность соматических клеток к дедифференцировке [[122]]. Очевидно необходимо найти и использовать такую стратегию, при которой удаление старых клеток сочеталось бы с замещением освободившейся ниши молоденькими клетками.

Ксенотрансплантация

Под ксенотрансплантацией здесь подразумевается выращивание человеческих органов в организме животного. Выращивать орган можно из предварительно созданного ex vivo органоида или же из ИПСК подсаженных в бластоцисту в которой выключены гены необходимые для образования соответствующего органа.

Выращивание органоидов

Органоиды – это культивируемые в лабораторных условиях, трехмерные скопления клеток, которые благодаря процессам самосборки образуют анатомические структуры, моделирующие в миниатюре орган и по возможности его физиологию [[123] [124]].

Большинство разработанных на сегодняшний день органоидов выращены на Матригеле (Matrigel) – трехмерной (3D) подложке позволяющей проводить культивирование в трехмерном пространстве. Благодаря тому, что они имеют очень небольшие размеры проблема с обеспечением их питательными веществами и кислородом решается с помощью проточной системы смены среды для инкубации или простого перемешивания.

 Иногда вместо Матригеля используют другие подложки, например, очень легко приготовляемую смесь желатина с наночастицами [[125]], (обычно 2% желатина и 1,5% наночастиц). Вырастить на такой подложке органоиды, продуцирующие антитела, можно всего за неделю. Чтобы отделить органоиды от этой подложки достаточно разрушить ее коллагеназой.

Такэбэ с соавт. разработали обобщенный метод для формирования зачатков органов из различных тканей путем объединения тканеспецифических клеток-предшественников, получаемых из плюрипотентных стволовых клеток, с эндотелиальными и мезенхимальными стволовыми клетками (МСК). Они обнаружили, что менее зрелые ткани или органоиды, генерируемые с помощью принципа самоорганизующейся конденсации более эффективно восстанавливают функции зрелых органов после трансплантации, чем конденсаты, полученные от клеток более продвинутой стадии [[126]].

На сегодняшний день, благодаря удивительной способности клеток к самоорганизации, получены: кардиоваскулярные органоиды, способные к сокращению [[127] [128]], органоиды печени [[129] [130]], почек [[131] [132]], поджелудочной железы [[133]], тканей кишечника [[134]] с криптами и ворсинками из саморганизованного из кишечной клетки Lgr5+ кишечного эпителия [[135]], легочной ткани [[136]], простаты [[137]], глазной чаши со слоем инервированной сетчатки [[138]], головного мозга с четко сформированными кортикальными зонами [[139] [140]], тимуса [[141]]. И это далеко не полный список, усиленно пополнявшийся в течение этого, прошлого и позапрошлого года [[142]].

Выращивание органов в лимфатическом узле

В тех случаях, когда требуется не заменить больной орган сразу, а подсадить к нему на подмогу молоденький и еще не достаточно физиологически функциональный орган, которому предстоит еще «дозреть», удобно поместить этот орган в лимфатический узел [[143]].

Лимфатические узлы располагаются по ходу лимфатических сосудов обычно гроздьями, поблизости от кровеносных сосудов. Притекающая лимфа приносит в лимфатический узел чужеродные антигены, что приводит к развитию в них реакции иммунного ответа в виде активации деления Т клеток и увеличения лимфоузла чтобы вместить возросшее число клеток. При образовании метастазов рака обычно раковые клетки мигрируют в лимфатические узлы и образуют в них колонии [[144]]. Тот же принцип можно использовать для выращивания органа, поместив его «затравку» в лимфатический узел пациента или суррогатного донора, которым может стать гуманизированное (толерантное к человеческим клеткам) животное. Важно отметить, что кровеносные сосуды в ближайшем окружении лимфатического узла при этом обычно способствуют неоваскуляризации и функциональному созреванию такого эктопического органа. По мере развития такие эктопические органы должны компенсировать ослабевшую функцию поврежденного или больного нативного органа [[145] [146]]. Подобные малоинвазивные методы могут позволить осуществлять лечение пациентов, которым из-за сопутствующих заболеваний, противопоказаны более инвазивные хирургические методы терапии, а также в случаях, когда подобрать донорский орган не представляется возможным [[147] [148] [149]].

Схематическое представление различных новых подходов к лечению печени. По [[150]]. А. Получаемые из ИПСК омоложенные гепатоциты и другие клетки печени можно использовать для : 1. инъекций с целью заместительной терапии; 2. их можно заселять в печень донора (например, взятую у животного) и освобожденную от клеток децеллюляризацией; 3. можно из омоложенных гепатоцитов и других необходимых для этого клеток выращивать органоиды, а затем эти органоиды либо непосредственно трансплантировать пациенту, либо сперва выращивать их дальше в организме животного; 4. можно использовать их для создания тканей с помощью биопринтера. В случае необратимых морфологических изменений печени и при биопринтинге не обойтись без пункта Б – инженерии печени. В.- для восстановления функций печени могут понадобиться методы генной инженерии – если болезнь связана с мутациями и наследственными нарушениями генома, а также препараты, влияющие на эпигеном. Г — Метод комплементации бластоцисты смотри подробнее в следующем рисунке.

Иммунная система человека распознает ткани свиней, так как они вырабатывают характерный сахар называемый альфа 1,3 галактозой. Этот сахар метит поверхность свиных клеток. Методами генной инженерии созданы свиньи, у которых этот сахар не попадает на поверхность клеток.

Генетически модифицированные поросята считаются наиболее подходящими донорами органов для трансплантации, поскольку они во многом имеют анатомические и физиологические параметры (такие как артериальное давление) похожие на аналогичные показатели человека. Кроме того их легко скрещивать и размножать, причем они имеют многочисленное потомство. Разработаны методы получения подобных животных [[151] [152] [153] [154] [155] [156]]. Однако чтобы клетки животного-донора не попали в организм пациента все они должны содержать индуцируемый малой молекулой ген активатор апоптоза. Тогда перед трансплантацией органа пациенту можно провести очистку его от клеток животного, проведя перфузию органа средой содержащей активатор апоптоза клеток животного-донора.

Метод комплиментации бластоцисты

Инъекция плюрипотентных стволовых клеток в бластоцисту, на самых ранних стадиях развития после оплодотворения, позволяет получить комбинированную химерную бластоцисту. Если при этом бластоциста взята от животного, не имеющего какого-то гена (например, гена RAG-2, который необходим для образования зрелых B и T лимфоцитов: или гена Pdx1, без которого мышки не способны к образованию и развитию панкреатической железы; или гена Sal1, без которого не может происходить генез почек; или гена Nkx2.5 необходимого для формирования сердца; или гена Fah, необходимого для дифференцировки гепатоцитов печени), то соответственно дефицит будет восполнен за счет образования клеток происходящих от плюрипотентных стволовых клеток [[157] [158]].

Такая система дополнения бластоцисты была использована для восполнения дефицита эпителия тимуса [[159]], сердца [[160]], поджелудочной железы [[161] [162]], почек [[163]] .

Выращивание органов путём успешного создания химер требует преодоления ряда препятствий, связанных с тем, что свиньи довольно далекий от человека вид и правильнее, хотя не так удобно, было бы использовать для этих целей обезьян. Известно, что факторы участвующие в регуляции построения органа далеко не всегда эволюционно консервативны, поэтому межвидовая комплементация бластоцисты не всегда успешна. Например, неудачной оказалась попытка вырастить в организме мыши почки из ИПСК клеток крысы, хотя использование ИПСК мыши (внутривидовой химеризм) получить почки позволял [[164]]. Кроме того, сложности связаны с тем что необходимо согласовывать сроки развития донора и акцептора клеток, поскольку это имеет решающее значение для успешного приживления плюрипотентных и мультипотентных стволовых клеток и их способности участвовать в образовании межвидовых химер. Также, часть клеток животного попадает в выращиваемый человеческий орган, а их удаление может привести к гибели органа. Есть и другие сложности [[165]]. Например, ксенотрансплантация может сопровождаться переносом от свиней различных микроорганизмов включая вирусы, бактерии, грибки и паразиты. Учитывая тот факт, что после пересадки реципиенту трансплантанта может понадобиться курс подавления иммунитета, проблема инфекции может быть очень серьезной. Заражение большинством микроорганизмов может быть предотвращено скринингом (отбором) и скрещиванием линий животных чистых от микроорганизмов. Исключение составляют вирусы, в частности ретровирусы PERV (porcine endogenous retroviruses) которые безопасны для свиней, но не для человека. PERV представляют особый риск, так как они присутствуют в геноме всех свиней и способны инфицировать человеческие клетки. Чтобы предотвратить подобный риск, исследователи инактивировали в свиных эмбрионах 62 свиных эндогенных ретровируса PERV [[166]].

Технология получения человеческих органов методом комплементации бластоцисты, с использованием редактирования свиного генома с помощью CRISPR/Cas9 (для того чтобы отключить у свиньи образование собственных клеток, необходимых для данного органа [[167]]) и человеческих ИПСК для замещения (комплементации) этих клеток в свиной зиготе [[168]]. Химерную зиготу затем подсаживают суррогатной свиноматке для получения химерных поросят с человеческим органом. По материалу [[169]]. Справедливости ради следует отметить, что практических шагов по воплощению в жизнь этой технологии, кроме опытов по редактированию генома свиньи, никто не предпринимал. И дело не только в этических запретах на создание химер человек-свинья, а в том, что попытки подсадить человеческие ИПСК в бластоцисту свиньи не были успешными из-за того, что человеческие ИПСК недостаточно «наивны» и механика формирования бластоцисты у человека отличается от таковой у животных [[170]]

Заключение

Из всего вышеописанного наиболее близкими к практическому применению для лечения здоровых людей от старости мне кажутся технологии профилактической очистки крови от токсинов, вызывающих воспалительные процессы (таких как хемокин CCL11 (C–C motif chemokine 11) известный как эотаксин), а также экзосом старого организма, и обогащение её терапевтическими экзосомами с РНК продлевающими жизнь. Появление таких технологий следует ожидать в ближайшие 5-10 лет. Также почти готовы к практическому применению технологии типа «искусственная печень» с органоидами, работающими вне организма, в проточном устройстве. Можно ожидать также скорого появления технологий с инкапсулированными генмодифицированными ММСК, подсаживаемыми в организм в качестве «фабрики по производству омолаживающих факторов и экзосом».

Уже применяются на практике технологии с использованием ИПСК для лечения некоторых старческих глазных болезней.

Что касается остальных вышеописанных технологий таких как комплиментация бластоцисты и выращивание органов в организме животных, то внедрения их на практике следует ожидать не ранее чем через 30-50 лет, если только не будут сделаны какие-то новые открытия, которые позволят преодолеть межвидовые барьеры.

 Литература

[1] J. B. Gurdon (2013) The egg and the nucleus: a battle for supremacy. Development140, 2449-2456. doi: 10.1242/dev.097170

[2] Masahito Tachibana, Paula Amato, Michelle Sparman, et al. & Shoukhrat Mitalipov (2013) Human Embryonic Stem Cells Derived by Somatic Cell Nuclear Transfer. Cell, 153(6), 1228-1238 http://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2013.05.006

[3] Hikabe, O., Hamazaki, N., Nagamatsu, G., Obata, Y., Hirao, Y., Hamada, N., … & Hayashi, K. (2016). Reconstitution in vitro of the entire cycle of the mouse female germ line. Nature. 539(7628), 299–303 doi:10.1038/nature20104 http://www.nature.com/nature/journal/v539/n7628/full/nature20104.html

[4] Takahashi, K; Yamanaka, S (2006) Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell 126 (4): 663–676. doi:10.1016/j.cell.2006.07.024.

[5] M. Leichsenring, J. Maes, R. Mossner, W. Driever, D. Onichtchouk.( 2013) Pou5f1 Transcription Factor Controls Zygotic Gene Activation In Vertebrates. Science; DOI: 10.1126/science.1242527

[6] Kunitomi, A., Yuasa, S., Sugiyama, F., Saito, Y., Seki, T., Kusumoto, D., … & Egashira, T. (2016). H1foo Has a Pivotal Role in Qualifying Induced Pluripotent Stem Cells. Stem cell reports, 6(6), 825–833. http://dx.doi.org/10.1016/j.stemcr.2016.04.015

[7] Burgstaller J.P. · Brem G. (2016). Aging of Cloned Animals: A Mini-Review. Gerontology, DOI: 10.1159/000452444 http://www.karger.com/Article/FullText/452444

[8] Rando, T. A., & Chang, H. Y. (2012). Aging, rejuvenation, and epigenetic reprogramming: resetting the aging clock. Cell, 148(1), 46-57. http://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2012.01.003 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0092867412000049

[9] Mahmoudi, S., & Brunet, A. (2012). Aging and reprogramming: a two-way street.Current opinion in cell biology, 24(6), 744-756. http://dx.doi.org/10.1016/j.ceb.2012.10.004 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0955067412001585

[10] Yehezkel, S., Rebibo-Sabbah, A., Segev, Y., Tzukerman, M., Shaked, R., Huber, I., … & Selig, S. (2011). Reprogramming of telomeric regions during the generation of human induced pluripotent stem cells and subsequent differentiation into fibroblast-like derivatives. Epigenetics, 6(1), 63-75. http://dx.doi.org/10.4161/epi.6.1.13390

[11] Brix, J., Zhou, Y., & Luo, Y. (2015). The Epigenetic Reprogramming Roadmap in Generation of iPSCs from Somatic Cells. Journal of Genetics and Genomics,42(12), 661-670. http://dx.doi.org/10.1016/j.jgg.2015.10.001

[12] Suhr ST, Chang EA, Tjong J, Alcasid N, Perkins GA, et al. (2010) Mitochondrial rejuvenation after induced pluripotency. PLoS One 5: e14095.

[13] Armstrong L, Tilgner K, Saretzki G, Atkinson SP, Stojkovic M, et al. (2010) Human induced pluripotent stem cell lines show stress defense mechanisms and mitochondrial regulation similar to those of human embryonic stem cells. Stem Cells 28: 661–673.

[14] Bukowiecki, R., Adjaye, J., & Prigione, A. (2013). Mitochondrial function in pluripotent stem cells and cellular reprogramming. Gerontology, 60(2), 174-182. DOI:10.1159/000355050

[15] Menendez, J. A., & Joven, J. (2014). Energy Metabolism and Metabolic Sensors in Stem Cells: The Metabostem Crossroads of Aging and Cancer. InOxidative Stress and Inflammation in Non-communicable Diseases-Molecular Mechanisms and Perspectives in Therapeutics (pp. 117-140). Springer International Publishing. DOI: 10.1007/978-3-319-07320-0_10

[16] Prigione A, Fauler B, Lurz R, Lehrach H, Adjaye J (2010) The senescence-related mitochondrial/oxidative stress pathway is repressed in human induced pluripotent stem cells. Stem Cells 28: 721–733.

[17] Prigione A, Hossini AM, Lichtner B, et al. & Adjaye, J. (2011) Mitochondrial-Associated Cell Death Mechanisms Are Reset to an Embryonic-Like State in Aged Donor-Derived iPS Cells Harboring Chromosomal Aberrations. PLoS ONE 6(11): e27352. doi:10.1371/journal.pone.0027352

[18] Kang, E., Wang, X., Tippner-Hedges, R., Ma, H., Folmes, C. D., Gutierrez, N. M., … & Koski, A. (2016). Age-Related Accumulation of Somatic Mitochondrial DNA Mutations in Adult-Derived Human iPSCs. Cell stem cell, 18(5), 625-636. http://dx.doi.org/10.1016/j.stem.2016.02.005

[19] Milhavet, O., & Lemaitre, J. M. (2014). Senescent-derived pluripotent stem cells are able to redifferentiate into fully rejuvenated cells. In Tumor Dormancy, Quiescence, and Senescence, Volume 2 (pp. 265-276). Springer Netherlands. DOI: 10.1007/978-94-007-7726-2_25 http://link.springer.com/chapter/10.1007/978-94-007-7726-2_25

[20] Lapasset, L., Milhavet, O., Prieur, A., Besnard, E., Babled, A., Aït-Hamou, N., … & Lehmann, S. (2011). Rejuvenating senescent and centenarian human cells by reprogramming through the pluripotent state. Genes & development, 25(21), 2248-2253. DOI:10.1101/gad.173922.111

[21] Mertens, J., Paquola, A. C., Ku, M., Hatch, E., Böhnke, L., Ladjevardi, S., … & Gonçalves, J. T. (2015). Directly reprogrammed human neurons retain aging-associated transcriptomic signatures and reveal age-related nucleocytoplasmic defects. Cell Stem Cell, 17(6), 705-718. http://dx.doi.org/10.1016/j.stem.2015.09.001

[22] Swahari, V., & Nakamura, A. (2016). Speeding up the clock: The past, present and future of progeria. Development, growth & differentiation, 58(1), 116-130. doi: 10.1111/dgd.12251

[23] Shimamoto, A., Kagawa, H., Zensho, K., Sera, Y., Kazuki, Y., Osaki, M., … & Yuasa, S. (2014). Reprogramming suppresses premature senescence phenotypes of Werner syndrome cells and maintains chromosomal stability over long-term culture. PLoS One, 9(11), e112900. doi:10.1371/journal.pone.0112900

[24] Liu, G. H., Barkho, B. Z., Ruiz, S., Diep, D., Qu, J., Yang, S. L., … & Thompson, J. (2011). Recapitulation of premature ageing with iPSCs from Hutchinson-Gilford progeria syndrome. Nature, 472(7342), 221-225. doi:10.1038/nature09879

[25] Zhang, W.et al.(2015) A Werner syndrome stem cell model unveils heterochromatin alterations as a driver of human aging. Science 348, 1160–1163

[26] Lee, S. J., Jung, Y. S., Yoon, M. H., Kang, S. M., Oh, A. Y., Lee, J. H., … & Chung, K. J. (2016). Interruption of progerin–lamin A/C binding ameliorates Hutchinson-Gilford progeria syndrome phenotype. The Journal of Clinical Investigation,126(10), 3879-3893.

[27] Fong, L. G., Frost, D., Meta, M., Qiao, X., Yang, S. H., Coffinier, C., & Young, S. G. (2006). A protein farnesyltransferase inhibitor ameliorates disease in a mouse model of progeria. Science, 311(5767), 1621-1623. DOI: 10.1126/science.1124875 http://europepmc.org/abstract/med/16484451

[28] Soria-Valles, C., & López-Otín, C. (2016). iPSCs: On the Road to Reprogramming Aging. Trends in Molecular Medicine. 22(8), 713–724 http://dx.doi.org/10.1016/j.molmed.2016.05.010

[29] Zheng, D., Wang, X., & Xu, R. H. (2016). One stone for multiple birds: Generating universally compatible human embryonic stem cells. STEM CELLS. DOI: 10.1002/stem.2407 http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/stem.2407/full

[30] Kimura, T., Yamashita, A., Ozono, K., & Tsumaki, N. (2016). Limited Immunogenicity of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cartilages.Tissue Engineering Part A. doi:10.1089/ten.tea.2016.0189 http://online.liebertpub.com/doi/abs/10.1089/ten.TEA.2016.0189?url

[31] Turinetto, V., Vitale, E., & Giachino, C. (2016). Senescence in human mesenchymal stem cells: functional changes and implications in stem cell-based therapy. International Journal of Molecular Sciences, 17(7), 1164; doi:10.3390/ijms17071164

[32] Oh, J., Lee, Y. D., & Wagers, A. J. (2014). Stem cell aging: mechanisms, regulators and therapeutic opportunities. Nature medicine, 20(8), 870-880.

[33] Duscher, D., Rennert, R. C., Januszyk, M et al., & Gurtner, G. C. (2014). Aging disrupts cell subpopulation dynamics and diminishes the function of mesenchymal stem cells. Scientific reports, 4. Article number: 7144 doi:10.1038/srep07144

[34] Fisher, S. A., Brunskill, S. J., Doree, C., Mathur, A., Taggart, D. P., & Martin-Rendon, E. (2013). Stem cell treatment for chronic ischaemic heart disease and congestive heart failure. Health. Issue 4. Art. No.: CD007888. DOI: 10.1002/14651858.CD007888.pub2.

[35] Chen, I. Y., Matsa, E. & Wu, J. C. (2016). Induced pluripotent stem cells: at the heart of cardiovascular precision medicine. Nat. Rev. Cardiol. 13, 333–349 

[36] Sun, Y. Q., Zhang, Y., Li, X., Deng, M. X., Gao, W. X., Yao, Y., … & Tse, H. F. (2015). Insensitivity of Human iPS Cells‐Derived Mesenchymal Stem Cells to Interferon‐γ‐induced HLA Expression Potentiates Repair Efficiency of Hind Limb Ischemia in Immune Humanized NOD Scid Gamma Mice. Stem Cells, 33(12), 3452-3467. DOI: 10.1002/stem.2094 http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/stem.2094/full

[37] Orive, G., Santos, E., Poncelet, D., Hernández, R. M., Pedraz, J. L., Wahlberg, L. U., … & Emerich, D. (2015). Cell encapsulation: technical and clinical advances.Trends in pharmacological sciences, 36(8), 537-546. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.tips.2015.05.003

[38] Moshaverinia, A., Chen, C., Xu, X., Ansari, S., Zadeh, H. H., Schricker, S. R., … & Shi, S. (2015). Regulation of the Stem Cell-Host Immune System Interplay Using Hydrogel Coencapsulation System with an Anti-Inflammatory Drug. Advanced functional materials, 25(15), 2296-2307. doi: 10.1002/adfm.201500055 http://europepmc.org/articles/pmc4478611

[39] Chan, A. T., Karakas, M. F., Vakrou, S., Afzal, J., Rittenbach, A., Lin, X., … & Elisseeff, J. H. (2015). Hyaluronic acid-serum hydrogels rapidly restore metabolism of encapsulated stem cells and promote engraftment. Biomaterials,73, 1-11. http://dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2015.09.001

[40] Pumberger, M., Qazi, T. H., Ehrentraut, M. C., Textor, M., Kueper, J., Stoltenburg-Didinger, G., … & Perka, C. (2016). Synthetic niche to modulate regenerative potential of MSCs and enhance skeletal muscle regeneration. Biomaterials, 99, 95-108. http://dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2016.05.009

[41] Chen, W., J Baylink, D., William Lau, K. H., & Zhang, X. B. (2016). Generation of Mesenchymal Stem Cells by Blood Cell Reprogramming. Current stem cell research & therapy, 11(2), 114-121. http://www.ingentaconnect.com/contentone/ben/cscr/2016/00000011/00000002/art00004

[42] Frobel, J., Hemeda, H., Lenz, M., Abagnale, G., Joussen, S., Denecke, B., … & Wagner, W. (2014). Epigenetic rejuvenation of mesenchymal stromal cells derived from induced pluripotent stem cells. Stem cell reports, 3(3), 414-422. http://dx.doi.org/10.1016/j.stemcr.2014.07.003

[43] Ng, J., Hynes, K., White, G., Sivanathan, K. N., Vandyke, K., Bartold, P. M., & Gronthos, S. (2016). Immunomodulatory Properties of Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Mesenchymal Cells. Journal of cellular biochemistry. DOI: 10.1002/jcb.25596

[44] Luzzani, C. D., & Miriuka, S. G. (2016). Pluripotent Stem Cells as a Robust Source of Mesenchymal Stem Cells. Stem Cell Reviews and Reports, 1-11. DOI: 10.1007/s12015-016-9695-z

[45] Sabapathy, V., & Kumar, S. (2016). hiPSC-derived iMSCs: NextGen MSCs as an advanced therapeutically active cell resource for regenerative medicine. Journal of cellular and molecular medicine. DOI: 10.1111/jcmm.12839

[46] Sheyn, D., Ben-David, S., Shapiro, G., De Mel, S., Bez, M., Ornelas, L., … & Tawackoli, W. (2016). Human Induced Pluripotent Stem Cells Differentiate Into Functional Mesenchymal Stem Cells and Repair Bone Defects. Stem Cells Translational Medicine, 5(11), 1447-1460; doi:10.5966/sctm.2015-0311

[47] Zhang Y, Deng H, Pan C, Hu Y, Wu Q, Liu N, Tang ZP (2016). Mesenchymal stromal cell therapy in ischemic stroke. Journal of Neurorestoratology,  2016(4), 79—83; DOI https://doi.org/10.2147/JN.S119874

[48] Meier, R. P., Mahou, R., Morel, P., Meyer, J., Montanari, E., Muller, Y. D., … & Bühler, L. H. (2015). Microencapsulated human mesenchymal stem cells decrease liver fibrosis in mice. Journal of hepatology, 62(3), 634-641. http://dx.doi.org/10.1016/j.jhep.2014.10.030 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S016882781400796X

[49] Saeed, H., Ahsan, M., Saleem, Z., Iqtedar, M., Islam, M., Danish, Z., & Khan, A. M. (2016). Mesenchymal stem cells (MSCs) as skeletal therapeutics–an update.Journal of biomedical science, 23(1), 41, DOI: 10.1186/s12929-016-0254-3 http://jbiomedsci.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12929-016-0254-3

[50] Miyagawa, S. et al. (2016). Building a new treatment for heart failure-transplantation of induced pluripotent stem cell-derived cells into the heart. Curr. Gene Ther. 16, 5–13 

[51] Wu, Y. T., Yu, I. S., Tsai, K. J., Shih, C. Y., Hwang, S. M., Su, I. J., & Chiang, P. M. (2015). Defining minimum essential factors to derive highly pure human endothelial cells from iPS/ES cells in an animal substance-free system. Scientific Reports 5, Article number: 9718 doi:10.1038/srep09718

[52] Clayton, Z. E., Sadeghipour, S., & Patel, S. (2015). Generating induced pluripotent stem cell derived endothelial cells and induced endothelial cells for cardiovascular disease modelling and therapeutic angiogenesis. International Journal of Cardiology, 197, 116-122. doi:10.1016/j.ijcard.2015.06.038

[53] Medina, R.J., O’Neill, C.L., Humphreys, M.W., Gardiner, T.A. & Stitt, A.W. (2010). Outgrowth endothelial cells: characterization and their potential for reversing ischemic retinopathy.Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 51, 5906–5913 

[54] Moubarik, C. et al. (2011). Transplanted late outgrowth endothelial progenitor cells as cell therapy product for stroke. Stem Cell Rev. 7, 208–220 

[55] Rana, A. A., & Callery, E. M. (2014). Applications of nuclear reprogramming and directed differentiation in vascular regenerative medicine. New biotechnology. DOI: 10.1016/j.nbt.2014.07.005

[56] Chatterjee, I., Li, F., Kohler, E. E., Rehman, J., Malik, A. B., & Wary, K. K. (2015). Induced Pluripotent Stem (iPS) Cell Culture Methods and Induction of Differentiation into Endothelial Cells. Methods in Molecular Biology, DOI:10.1007/7651_2015_203

[57] Shen, J., Tsai, Y. T., DiMarco, N. M., Long, M. A., Sun, X., & Tang, L. (2011). Transplantation of mesenchymal stem cells from young donors delays aging in mice. Scientific reports, 1: 67; DOI: 10.1038/srep00067 http://europepmc.org/articles/PMC3216554

[58] Hackl M, Brunner S, Fortschegger K, Schreiner C, Micutkova L, Muck C et al. (2010). miR-17, miR-19b, miR-20a, and miR-106a are down-regulated in human aging. Aging Cell; 9: 291–296.

[59] Hisamatsu, D., Ohno-Oishi, M., Nakamura, S., Mabuchi, Y., & Naka-Kaneda, H. (2016). Growth differentiation factor 6 derived from mesenchymal stem/stromal cells reduces age-related functional deterioration in multiple tissues. Aging (Albany NY), 8(6): 1259–1269; doi: 10.18632/aging.100982 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4931831/

[60] Stremersch, S., De Smedt, S. C., & Raemdonck, K. (2016). Therapeutic and diagnostic applications of extracellular vesicles. Journal of Controlled Release. doi: 10.1016/j.jconrel.2016.07.054 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0168365916305004

[61] Urbanelli, L., Buratta, S., Sagini, K., Tancini, B., & Emiliani, C. (2016). Extracellular Vesicles as New Players in Cellular Senescence. International Journal of Molecular Sciences, 17(9), 1408; doi:10.3390/ijms17091408 http://www.mdpi.com/1422-0067/17/9/1408/htm

[62] Chen TS, Yeo RWY, Arslan F, et al. (2013). Efficiency of Exosome Production Correlates Inversely with the Developmental Maturity of MSC Donor. J Stem Cell Res Ther 3(3), 145. doi:10.4172/2157-7633.1000145

[63] Xu, D., & Tahara, H. (2012) The role of exosomes and microRNAs in senescence and aging. Advanced drug delivery reviews.  65(3), 368–375 doi: 10.1016/j. addr.2012.07.010

[64] Marote, A., Teixeira, F. G., Mendes-Pinheiro, B., & Salgado, A. J. (2016). MSCs-derived exosomes: cell-secreted nanovesicles with regenerative potential.Frontiers in Pharmacology, 7 : 231, doi: 10.3389/fphar.2016.00231 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4971062/

[65] Qi X, Zhang J, Yuan H, Xu Z, Li Q, Niu X, Hu B, Wang Y, Li X. (2016). Exosomes Secreted by Human-Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Mesenchymal Stem Cells Repair Critical-Sized Bone Defects through Enhanced Angiogenesis and Osteogenesis in Osteoporotic Rats. Int J Biol Sci; 12(7):836-849. doi:10.7150/ijbs.14809. http://www.ijbs.com/v12p0836.htm

[66] Nelson, C. E., & Gersbach, C. A. (2016). Engineering Delivery Vehicles for Genome Editing. Annual review of chemical and biomolecular engineering, 7, 637-662. DOI: 10.1146/annurev-chembioeng-080615-034711 http://www.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev-chembioeng-080615-034711

[67] Lakhal, S., El Andaloussi, S., O’Loughlin, A. J., Li, J., & Wood, M. M. (2013) RNAi Therapeutic Delivery by Exosomes. In RNA Interference from Biology to Therapeutics (pp. 185-205). Springer US. DOI: 10.1007/978-1-4614-4744-3_9

[68] Zhou, Y., Zhou, G., Tian, C., Jiang, W., Jin, L., Zhang, C., & Chen, X. (2016). Exosome-mediated small RNA delivery for gene therapy. Wiley Interdisciplinary Reviews: RNA. (WIREs RNA), 7:758–771. doi: 10.1002/wrna.1363

[69] Basu, J., & Ludlow, J. W. (2016). Exosomes for repair, regeneration and rejuvenation. Expert opinion on biological therapy, 16(4), 489-506. http://dx.doi.org/10.1517/14712598.2016.1131976

[70] Hu, G., Li, Q., Niu, X., Hu, B., Liu, J., Zhou, S., Guo, S., Lang, Hl, Zhang, C., Wang, Y., & Deng, Zf (2015). Exosomes secreted by human-induced pluripotent stem cell-derived mesenchymal stem cells attenuate limb ischemia by promoting angiogenesis in mice. Stem Cell Research & Therapy, 6, 10. doi:10.1186/scrt546

[71] Yeo, R.W.Y., Lai, R.C., Zhang, B., Tan, S.S., Yin, Y., Teh, B.J., & Lim, S.K. (2013). Mesenchymal stem cell: an efficient mass producer of exosomes for drug delivery. Advanced drug delivery reviews, 65(3), 336–341. http://dx.doi.org/10.1016/j.addr.2012.07.001

[72] Zhang, Y., Chopp, M., Zhang, Z. G., Katakowski, M., Xin, H., Qu, C., … & Xiong, Y. (2016). Systemic administration of cell-free exosomes generated by human bone marrow derived mesenchymal stem cells cultured under 2D and 3D conditions improves functional recovery in rats after traumatic brain injury. Neurochemistry International. http://dx.doi.org/10.1016/j.neuint.2016.08.003

[73] Justin Williams, Flint Smith, Subodh Kumar, Murali Vijayan, P. Hemachandra Reddy (2016). Are MicroRNAs True Sensors of Ageing and Cellular Senescence? Ageing Research Reviews http://dx.doi.org/10.1016/j.arr.2016.11.008 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1568163716301684

[74] Montes, M., & Lund, A. H. (2016). Emerging roles of lncRNAs in senescence. FEBS Journal., 283, 2414–2426 doi:10.1111/febs.13679

[75] Dluzen, D. F., Noren Hooten, N., & Evans, M. K. (2016). Extracellular RNA in aging. Wiley Interdisciplinary Reviews: RNA. DOI: 10.1002/wrna.1385

[76] Zhang D, Lee H, Zhu Z, Minhas JK, Jin Y. (2016) Enrichment of selective miRNAs in exosomes and delivery of exosomal miRNAs in vitro and in vivo. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol DOI: 10.1152/ajplung.00423.2016 http://ajplung.physiology.org/content/early/2016/11/21/ajplung.00423.2016

[77] Justin Rebo, Melod Mehdipour, Ranveer Gathwala, Keith Causey, Yan Liu, Michael J. Conboy & Irina M. Conboy (2016). A single heterochronic blood exchange reveals rapid inhibition of multiple tissues by old blood. Nature Communications 7, Article number: 13363 doi: 10.1038/ncomms13363 http://www.nature.com/articles/ncomms13363

[78] Jessica Hamzelou (2016). Menopause reversal restores periods and produces fertile eggs. New Scientist, 3083, https://www.newscientist.com/article/mg23130833-100-menopause-reversal-restores-periods-and-produces-fertile-eggs/

[79] Bottegoni, C., Dei Giudici, L., Salvemini, S., Chiurazzi, E., Bencivenga, R., & Gigante, A. (2016). Homologous platelet-rich plasma for the treatment of knee osteoarthritis in selected elderly patients: an open-label, uncontrolled, pilot study.Therapeutic Advances in Musculoskeletal Disease, 8(2), 35-41 DOI: 10.1177/1759720X16631188 http://europepmc.org/abstract/med/27047571

[80] Middeldorp, J., Lehallier, B., Villeda, S. A., Miedema, S. S., Evans, E., Czirr, E., … & Masliah, E. (2016). Preclinical Assessment of Young Blood Plasma for Alzheimer Disease. JAMA neurology, 73(11), 1325-1333. doi:10.1001/jamaneurol.2016.3185 http://jamanetwork.com/journals/jamaneurology/article-abstract/2546925

[81] HUMAN CELLS FOR HUMAN GLYCOSYLATION PATTERN. CEVEC’s CAP-Go technology http://www.cevec.com/technology/capgo-glycosylation/

[82] Huber, A. K., Giles, D. A., Segal, B. M., & Irani, D. N. (2016). An emerging role for eotaxins in neurodegenerative disease. Clinical Immunology. http://dx.doi.org/10.1016/j.clim.2016.09.010 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1521661616304004

[83] Villeda, S. A., Luo, J., Mosher, K. I., Zou, B., Britschgi, M., Bieri, G., … & Lucin, K. M. (2011). The ageing systemic milieu negatively regulates neurogenesis and cognitive function. Nature, 477(7362), 90-94. doi:10.1038/nature10357 http://www.nature.com/nature/journal/v477/n7362/abs/nature10357.html

[84] Roy, S., Das, S., Munshi, A., Kaul, S., & Jyothy, A. (2014). Association of-1382A> G CCL11 gene variant with ischemic stroke, its subtypes and hemorrhagic stroke in a South Indian population. Neurology India, 62(4), 387 — 392. doi: 10.4103/0028-3886.141259.

[85] Джагаров Д. (2014). Простенький аппарат «искусственная селезенка» поможет врачам и ученым исследователям http://dmitrydzhagarov.livejournal.com/490.html

[86] Wyss-Coray, T. (2016). Ageing, neurodegeneration and brain rejuvenation. Nature, 539(7628), 180-186. doi:10.1038/nature20411 http://www.nature.com/nature/journal/v539/n7628/full/nature20411.html

[87] McIntosh, B. E., Brown, M. E., Duffin, B. M., Maufort, J. P., Vereide, D. T., Slukvin, I. I., & Thomson, J. A. (2015). Nonirradiated NOD, B6. SCID Il2rγ−/− Kit W41/W41 (NBSGW) Mice Support Multilineage Engraftment of Human Hematopoietic Cells.Stem cell reports, 4(2), 171-180. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.stemcr.2014.12.005

[88] Theocharides, A. P., Rongvaux, A., Fritsch, K., Flavell, R. A., & Manz, M. G. (2016). Humanized hemato-lymphoid system mice. haematologica, 101(1), 5-19, doi: 10.3324/haematol.2014.115212 http://europepmc.org/articles/pmc4697887

[89] Rahmig, S., Kronstein-Wiedemann, R., Fohgrub, J., Kronstein, N., Nevmerzhitskaya, A., Bornhäuser, M., … & Waskow, C. (2016). Improved Human Erythropoiesis and Platelet Formation in Humanized NSGW41 Mice. Stem Cell Reports, 7(4), 591-601. http://dx.doi.org/10.1016/j.stemcr.2016.08.005 http://www.cell.com/stem-cell-reports/fulltext/S2213-6711(16)30172-2

[90] Lee, K., Kwon, D. N., Ezashi, T., Choi, Y. J., Park, C., Ericsson, A. C., … & Kim, D. Y. (2014). Engraftment of human iPS cells and allogeneic porcine cells into pigs with inactivated RAG2 and accompanying severe combined immunodeficiency. Proceedings of the National Academy of Sciences, 111(20), 7260-7265. DOI: 10.1073/pnas.1406376111

[91] Yuki Taya, Yasunori Ota, Adam C. Wilkinson, et al., & Hiromitsu Nakauchi, Satoshi Yamazaki (2016). Depleting dietary valine permits nonmyeloablative mouse hematopoietic stem cell transplantation. Science, 354(6316), 1152-1155 . DOI: 10.1126/science.aag3145 http://science.sciencemag.org/content/354/6316/1152?utm_campaign=toc_sci-mag_2016-12-01&et_rid=17786682&et_cid=1031518

[92] Welman, T., Michel, S., Segaren, N., & Shanmugarajah, K. (2015). Bioengineering for Organ Transplantation: Progress and Challenges.Bioengineered,. DOI:10.1080/21655979.2015.1081320

[93] Jain, A., & Bansal, R. (2015). Applications of regenerative medicine in organ transplantation. J Pharm Bioallied Sci.; 7(3): 188–194. doi: 10.4103/0975-7406.160013

[94] Hunsberger, J., Neubert, J., Wertheim, J. A., Allickson, J., & Atala, A. (2016). Bioengineering Priorities on a Path to Ending Organ Shortage. Current Stem Cell Reports, 2(2), 118-127. doi:10.1007/s40778-016-0038-4 http://link.springer.com/article/10.1007/s40778-016-0038-4/fulltext.html

[95] Pitkin, Z. (2016). New phase of growth for xenogeneic-based bioartificial organs.International Journal of Molecular Sciences, 17(9), 1593; doi:10.3390/ijms17091593 http://www.mdpi.com/1422-0067/17/9/1593/htm

[96] Prendergast, M. E., Solorzano, R. D., & Cabrera, D. (2016). Bioinks for biofabrication: current state and future perspectives. Journal of 3D printing in medicine, doi:10.2217/3dp-2016-0002 http://www.futuremedicine.com/doi/abs/10.2217/3dp-2016-0002

[97] Ozbolat, I. T., Moncal, K. K., & Gudapati, H. (2016). Evaluation of bioprinter technologies. Additive Manufacturing. http://dx.doi.org/10.1016/j.addma.2016.10.003 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2214860416301312

[98] Afzal, J., Chang, H., Goyal, R., & Levchenko, A. (2016). Mechanics of Microenvironment as Instructive Cues Guiding Stem Cell Behavior. Current Stem Cell Reports, 2(1), 62-72. doi:10.1007/s40778-016-0033-9 http://link.springer.com/article/10.1007/s40778-016-0033-9

[99] Tricomi, B. J., Dias, A. D., & Corr, D. T. (2016). Stem cell bioprinting for applications in regenerative medicine. Annals of the New York Academy of Sciences, 1383(1), 115-124. DOI: 10.1111/nyas.13266 http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/nyas.13266/full

[100] Kang, H. W., Lee, S. J., Ko, I. K., Kengla, C., Yoo, J. J., & Atala, A. (2016). A 3D bioprinting system to produce human-scale tissue constructs with structural integrity. Nature biotechnology, 34(3), 312-319. doi:10.1038/nbt.3413 http://www.nature.com/nbt/journal/v34/n3/abs/nbt.3413.html

[101] R.C. Hill, E.A. Calle, M. Dzieciatkowska, et al. (2015). Quantification of extracellular matrix proteins from a rat lung scaffold to provide a molecular readout for tissue engineering. Mol. Cell. Proteomics MCP, 14, 961–973 doi: http://dx.doi.org/10.1074/mcp.M114.045260

[102] Khan, A. A. (2016). Emerging technologies for development of humanized bio-artificial organs. Journal of Medical and Allied Sciences, 6(1), 1-2. DOI: 10.5455/jmas.216749

[103] Birla, R. (2016). Introduction to Organ Fabrication. In Tissue Engineering for the Heart (pp. 1-30). Springer International Publishing. DOI: 10.1007/978-3-319-41504-8_1 http://link.springer.com/chapter/10.1007/978-3-319-41504-8_1

[104] Scarritt, M. E., Pashos, N. C., & Bunnell, B. A. (2015). A review of cellularization strategies for tissue engineering of whole organs. Frontiers in bioengineering and biotechnology, 3. 43 doi: 10.3389/fbioe.2015.00043

[105] Welman, T., Michel, S., Segaren, N., & Shanmugarajah, K. (2015). Bioengineering for Organ Transplantation: Progress and Challenges.Bioengineered, DOI:10.1080/21655979.2015.1081320

[106] Kiyotake, E. A., Beck, E. C. and Detamore, M. S. (2016), Cartilage extracellular matrix as a biomaterial for cartilage regeneration. Annals of the New York Academy of Sciences, 1383: 139–159. doi: 10.1111/nyas.13278 http://onlinelibrary.wiley.com/wol1/doi/10.1111/nyas.13278/abstract

[107] Badylak, S. F., Dziki, J. L., Sicari, B. M., Ambrosio, F., & Boninger, M. L. (2016). Mechanisms by which acellular biologic scaffolds promote functional skeletal muscle restoration. Biomaterials, 103, 128-136. http://dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2016.06.047

[108] Piraino, S., Boero, F., Aeschbach, B., and Schmid, V. (1996). Reversing the life cycle: Medusae transforming into polyps and cell transdifferentiation inTurritopsis nutricula (Cnidaria, Hydrozoa). Biol. Bull. 90: 302-312.

[109] Beck, SD; Bharadwaj, RK (1972). Reversed development and cellular aging in an insect. Science. 178 (4066): 1210–1211. doi:10.1126/science.178.4066.1210

[110] Lucas, E. R., Privman, E., & Keller, L. (2016). Higher expression of somatic repair genes in long-lived ant queens than workers. Aging (Albany NY), 8(9), 1940 –1949. doi: 10.18632/aging.101027 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5076446/

[111] Weiskirchen, R., & Tacke, F. (2016). Liver fibrosis: Which mechanisms matter?.Clinical Liver Disease, 8(4), 94-99. DOI: 10.1002/cld.581 http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/cld.581/full

[112] Rezvani, M., Español-Suñer, R., Malato, Y., Dumont, L., Grimm, A. A., Kienle, E., … & Schwabe, R. F. (2016). In Vivo Hepatic Reprogramming of Myofibroblasts with AAV Vectors as a Therapeutic Strategy for Liver Fibrosis. Cell stem cell,18(6), 809-816. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.stem.2016.05.005 http://www.cell.com/cell-stem-cell/abstract/S1934-5909(16)30089-3

[113] Song, G., Pacher, M., Balakrishnan, A., Yuan, Q., Tsay, H. C., Yang, D., … & Araúzo-Bravo, M. J. (2016). Direct Reprogramming of Hepatic Myofibroblasts into Hepatocytes In Vivo Attenuates Liver Fibrosis. Cell stem cell, 18(6), 797-808. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.stem.2016.01.010 http://www.cell.com/cell-stem-cell/abstract/S1934-5909(16)00011-4

[114] Novo, E., Cannito, S., & Parola, M. (2016). In vivo reprogramming of hepatic myofibroblasts into hepatocytes attenuates liver fibrosis: back to the future?.Stem Cell Investigation, 3: 53. doi: 10.21037/sci.2016.09.08 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5067366/

[115] Ma, H., Wang, L., Liu, J., & Qian, L. (2017). Direct Cardiac Reprogramming as a Novel Therapeutic Strategy for Treatment of Myocardial Infarction. Cardiac Gene Therapy: Methods and Protocols, 69-88. DOI: 10.1007/978-1-4939-6588-5_5 http://link.springer.com/protocol/10.1007/978-1-4939-6588-5_5

[116] Cao, N., Huang, Y., Zheng, J., Spencer, C. I., Zhang, Y., Fu, J. D., … & Ma, T. (2016). Conversion of human fibroblasts into functional cardiomyocytes by small molecules. Science, 352(6290), 1216-1220.
DOI: 10.1126/science.aaf1502 http://science.sciencemag.org/content/352/6290/1216

[117] Liu, L., Lei, I., Karatas, H., Li, Y., Wang, L., Gnatovskiy, L., … & Wang, Z. (2016). Targeting Mll1 H3K4 methyltransferase activity to guide cardiac lineage specific reprogramming of fibroblasts. Cell Discovery, 2, 16036. doi: 10.1038/celldisc.2016.36 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5113048/

[118] Koblas, T., Leontovyc, I., Loukotova, S., Kosinova, L., & Saudek, F. (2016). Reprogramming of Pancreatic Exocrine Cells AR42J Into Insulin-producing Cells Using mRNAs for Pdx1, Ngn3, and MafA Transcription Factors. Molecular Therapy—Nucleic Acids, 5(5), e320; doi:10.1038/mtna.2016.33 http://www.nature.com/mtna/journal/v5/n5/full/mtna201633a.html

[119] Lima MJ, Muir KR, Docherty HM, McGowan NWA, Forbes S, Heremans Y, et al. (2016) Generation of Functional Beta-Like Cells from Human Exocrine Pancreas. PLoS ONE 11(5): e0156204. doi:10.1371/journal.pone.0156204 http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0156204

[120] Baker DJ, Childs BG, Durik M, Wijers ME, Sieben CJ, Zhong J, A Saltness R, Jeganathan KB, Verzosa GC, Pezeshki A, Khazaie K, Miller JD, van Deursen JM (2016). Naturally occurring p16(Ink4a)-positive cells shorten healthy lifespan. Nature. 530: 184–189. doi:10.1038/nature16932

[121] Demaria M, Ohtani N, Youssef SA, Rodier F, Toussaint W, Mitchell JR, Laberge RM, Vijg J, Van Steeg H, Dollé ME, Hoeijmakers JH, de Bruin A, Hara E, Campisi J (2014). An essential role for senescent cells in optimal wound healing through secretion of PDGF-AA. Developmental Cell. 31 (6): 722–33. doi:10.1016/j.devcel.2014.11.012.

[122] Mosteiro, L., Pantoja, C., Alcazar, N., Marión, R. M., Chondronasiou, D., Rovira, M., … & Gómez-López, G. (2016). Tissue damage and senescence provide critical signals for cellular reprogramming in vivo. Science, 354(6315), aaf4445. DOI: 10.1126/science.aaf4445 http://science.sciencemag.org/content/354/6315/aaf4445

[123] Werner, S., Vu, H. T. K., & Rink, J. C. (2016). Self-organization in development, regeneration and organoids. Current Opinion in Cell Biology. http://dx.doi.org/10.1016/j.ceb.2016.09.002

[124] Koo, B. K., & Huch, M. (2016). Organoids: A new in vitro model system for biomedical science and disease modelling and promising source for cell-based transplantation. Developmental Biology. 420(2), 197–198 http://dx.doi.org/10.1016/j.ydbio.2016.10.017

[125] Purwada, A., Jaiswal, M. K., Ahn, H., Nojima, T., Kitamura, D., Gaharwar, A. K., … & Singh, A. (2015). Ex vivo engineered immune organoids for controlled germinal center reactions. Biomaterials, 63, 24-34. doi:10.1016/j.biomaterials.2015.06.002

[126] Takebe, T., Enomura, M., Yoshizawa, E., Kimura, M., Koike, H., Ueno, Y., … & Taniguchi, H. (2015). Vascularized and Complex Organ Buds from Diverse Tissues via Mesenchymal Cell-Driven Condensation. Cell stem cell, 16(5), 556-565. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.stem.2015.03.004

[127] Shkumatov A, Baek K, Kong H (2014) Matrix Rigidity-Modulated Cardiovascular Organoid Formation from Embryoid Bodies. PLoS ONE 9(4): e94764. DOI:10.1371/journal.pone.0094764

[128] Patel, A. K., Celiz, A. D., Rajamohan, D., Anderson, D. G., Langer, R., Davies, M. C., … & Denning, C. (2015). A defined synthetic substrate for serum free culture of human stem cell derived cardiomyocytes with improved functional maturity identified using combinatorial materials microarrays. Biomaterials. 61, 257–265. DOI:10.1016/j.biomaterials.2015.05.019

[129] Takanori Takebe, Keisuke Sekine, Masahiro Enomura, et al. & Hideki Taniguchi (2013) Vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant. Nature DOI:10.1038/nature12271

[130] Shinozawa, T., Yoshikawa, H. Y., & Takebe, T. (2016). Reverse engineering liver buds through self-driven condensation and organization towards medical application. Developmental Biology. 420(2), 221–229 http://dx.doi.org/10.1016/j.ydbio.2016.06.036

[131] Little, M. H., & Takasato, M. (2015). Generating a self-organizing kidney from pluripotent cells. Current opinion in organ transplantation, 20(2), 178-186. DOI:10.1097/MOT.0000000000000174

[132] Takasato, M., & Little, M. H. (2016). A strategy for generating kidney organoids: recapitulating the development in human pluripotent stem cells. Developmental Biology. 420(2), 210–220 http://dx.doi.org/10.1016/j.ydbio.2016.08.024

[133] Greggio, C., De Franceschi, F., & Grapin‐Botton, A. (2015). Concise Reviews: In Vitro-Produced Pancreas Organogenesis Models in Three Dimensions: Self-Organization From Few Stem Cells or Progenitors. Stem Cells, 33(1), 8-14. doi: 10.1002/stem.1828

[134] Sinagoga, K. L., & Wells, J. M. (2015). Generating human intestinal tissues from pluripotent stem cells to study development and disease. The EMBO journal, 34(9), 1149-1163. DOI 10.15252/embj.201490686

[135] Sato T, Clevers H (2013) Growing self-organizing mini-guts from a single intestinal stem cell: mechanism and applications. Science, 340, 1190–1194. doi: 10.1126/science.1234852

[136] Dye, B. R., Hill, D. R., Ferguson, M. A., Tsai, Y. H., Nagy, M. S., Dyal, R., … & Spence, J. R. (2015). In vitro generation of human pluripotent stem cell derived lung organoids. Elife, 4, e05098. DOI:http://dx.doi.org/10.7554/eLife.05098

[137] Calderon-Gierszal EL, Prins GS (2015) Directed Differentiation of Human Embryonic Stem Cells into Prostate Organoids In Vitro and its Perturbation by Low-Dose Bisphenol A Exposure. PLoS ONE 10(7): e0133238. DOI:10.1371/journal.pone.0133238

[138] Eiraku M, Takata N, Ishibashi H, Kawada M, Sakakura E, et al. (2011) Self-organizing optic-cup morphogenesis in three-dimensional culture. Nature 472: 51–56. doi: 10.1038/nature09941

[139] Lancaster MA, Renner M, Martin CA, Wenzel D, Bicknell LS, et al. (2013) Cerebral organoids model human brain development and microcephaly. Nature 501: 373–379. doi: 10.1038/nature12517

[140] Chwalek, K., Tang-Schomer, M. D., Omenetto, F. G., & Kaplan, D. L. (2015). In vitro bioengineered model of cortical brain tissue. Nature protocols, 10(9), 1362-1373. doi:10.1038/nprot.2015.091

[141] Fan, Y., Tajima, A., Goh, S. K., Geng, X., Gualtierotti, G., Grupillo, M., … & Trucco, M. (2015).Bioengineering thymus organoids to restore thymic function and induce donor-specific immune tolerance to allografts. Molecular Therapy, 23: 1262-1277 DOI:10.1038/mt.2015.77

[142] Yin, X., Mead, B. E., Safaee, H., Langer, R., Karp, J. M., & Levy, O. (2016). Engineering Stem Cell Organoids. Cell stem cell, 18(1), 25-38. http://dx.doi.org/10.1016/j.stem.2015.12.005

[143] Lagasse, E. (2016). Growing a Surrogate Organ in Lymph Node. In Synthetic Immunology (pp. 171-180). Springer Japan. DOI: 10.1007/978-4-431-56027-2_8 http://link.springer.com/chapter/10.1007/978-4-431-56027-2_8

[144] Sleeman, J. P., & Thiele, W. (2009). Tumor metastasis and the lymphatic vasculature. International Journal of Cancer, 125(12), 2747-2756.

[145] DeWard, A. D., Komori, J., & Lagasse, E. (2014). Ectopic transplantation sites for cell-based therapy. Curr Opin Organ Transplant.; 19(2): 169–174. doi: 10.1097/MOT.0000000000000050

[146] Francipane, M. G., & Lagasse, E. (2014). Maturation of embryonic tissues in a lymph node: a new approach for bioengineering complex organs. Organogenesis, 10(3), 323-331.doi: 10.1080/15476278.2014.995509

[147] Francipane, M. G., & Lagasse, E. (2015). The Lymph Node as a New Site for Kidney Organogenesis. Stem cells translational medicine, 4(3), 295-307.

[148] Francipane, M. G., & Lagasse, E. (2015). Pluripotent stem cells to rebuild a kidney: the lymph node as a possible developmental niche. Cell Transplantation. DOI: 10.3727/096368915X688632

[149] Komori, J., Boone, L., DeWard, A., Hoppo, T., & Lagasse, E. (2012). The mouse lymph node as an ectopic transplantation site for multiple tissues.Nature biotechnology, 30(10), 976-983.

 [150] Takeishi, K., Guzman-Lepe, J., Handa, K., Matsubara, K., Fukumitsu, K., Dorko, K., … & Soto-Gutierrez, A. (2016). Liver-Regenerative Transplantation: Regrow and Reset. American journal of transplantation: official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons,16(6), 1688-1696. doi: 10.1111/ajt.13678 http://europepmc.org/articles/pmc4874858

[151] Wang, Y., Du, Y., Shen, B., Zhou, X., Li, J., Liu, Y., … & Wei, H. (2015). Efficient generation of gene-modified pigs via injection of zygote with Cas9/sgRNA. Scientific reports, 5. Article number: 8256 doi:10.1038/srep08256

 [152] Hai, T., Teng, F., Guo, R., Li, W. & Zhou, Q. (2014). One-step generation of knockout pigs by zygote injection of CRISPR/Cas system. Cell Res. 24, 372–375 doi:10.1038/cr.2014.11

[153] Agnieszka Nowak, et al (2015). Modifications of pig genome with expression gene constructs to produce organs resistant to acute transplant rejection. Asian Journal of Biomedical and Pharmacutical Sciences, 5(45), 01-07

[154] Cooper, D. K., Ekser, B., Ramsoondar, J., Phelps, C., & Ayares, D. (2015). The role of genetically-engineered pigs in xenotransplantation research. The Journal of Pathology, DOI: 10.1002/path.4635

[155] Cooper, D. K., & Bottino, R. (2015). Recent advances in understanding xenotransplantation: implications for the clinic. Expert Review of Clinical Immunology, (ahead-of-print), 1-12. DOI: 10.1586/1744666X.2015.1083861

[156] Sato, M., Kagoshima, A., Saitoh, I., Inada, E., Miyoshi, K., Ohtsuka, M., Nakamura, S., Sakurai, T. and Watanabe, S. (2015), Generation of α-1,3-Galactosyltransferase-Deficient Porcine Embryonic Fibroblasts by CRISPR/Cas9-Mediated Knock-in of a Small Mutated Sequence and a Targeted Toxin-Based Selection System. Reproduction in Domestic Animals, 50(5), 872–880. doi: 10.1111/rda.12565

[157] Chen, J., Lansford, R., Stewart, V., Young, F., & Alt, F. W. (1993). RAG-2-deficient blastocyst complementation: an assay of gene function in lymphocyte development. Proceedings of the National Academy of Sciences, 90(10), 4528-4532 doi: 10.1073/pnas.90.10.4528

[158] Nagashima, H., & Matsunari, H. (2016). Growing human organs in pigs—A dream or reality?. Theriogenology, 86(1), 422-426. http://dx.doi.org/10.1016/j.theriogenology.2016.04.056 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0093691X16300954

[159] Müller, S. M., Terszowski, G., Blum, C., Haller, C., Anquez, V., Kuschert, S., … & Rodewald, H. R. (2005). Gene targeting of VEGF-A in thymus epithelium disrupts thymus blood vessel architecture. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 102(30), 10587-10592 doi: 10.1073/pnas.0502752102

[160] Fraidenraich, D., Stillwell, E., Romero, E., Wilkes, D., Manova, K., Basson, C. T., & Benezra, R. (2004). Rescue of cardiac defects in id knockout embryos by injection of embryonic stem cells. Science, 306(5694), 247-252. DOI: 10.1126/science.1102612

[161] Kobayashi, T., Yamaguchi, T., Hamanaka, S., Kato-Itoh, M., Yamazaki, Y., Ibata, M., … & Nakauchi, H. (2010). Generation of rat pancreas in mouse by interspecific blastocyst injection of pluripotent stem cells. Cell, 142(5), 787-799. oi:10.1016/j.cell.2010.07.039

[162] Matsunari, H., Nagashima, H., Watanabe, M., Umeyama, K., Nakano, K., Nagaya, M., … & Nakauchi, H. (2013). Blastocyst complementation generates exogenic pancreas in vivo in apancreatic cloned pigs. Proceedings of the National Academy of Sciences, 110(12), 4557-4562. doi: 10.1073/pnas.1222902110

[163] Usui, J. I., Kobayashi, T., Yamaguchi, T., Knisely, A. S., Nishinakamura, R., & Nakauchi, H. (2012). Generation of kidney from pluripotent stem cells via blastocyst complementation. The American journal of pathology, 180(6), 2417-2426. doi:10.1016/j.ajpath.2012.03.007

[164] Usui, J.-I., Kobayashi, T.,Yamaguchi, T., Knisely, A. S., Nishinakamura, R., &Nakauchi, H. (2012).Generation of kidney from pluripotent stem cells via blastocyst complementation. American Journal of Pathology, 180(6), 2417–2426. http://dx.doi.org/10.1016/j.ajpath.2012.03.007 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0002944012002386

[165] Jun Wu, Henry T. Greely, Rudolf Jaenisch, Hiromitsu Nakauchi, Janet Rossant & Juan Carlos Izpisua Belmonte (2016). Stem cells and interspecies chimaeras. Nature, 540, 51–59, doi:10.1038/nature20573 http://www.nature.com/nature/journal/v540/n7631/full/nature20573.html

[166] Sara Reardon (2015). Gene-editing record smashed in pigs. Researchers modify more than 60 genes in effort to enable organ transplants into humans. Nature, doi:10.1038/nature.2015.18525 http://www.nature.com/news/gene-editing-record-smashed-in-pigs-1.18525

 [167] Wang, Y., Du, Y., Shen, B., Zhou, X., Li, J., Liu, Y., … & Wei, H. (2015). Efficient generation of gene-modified pigs via injection of zygote with Cas9/sgRNA. Scientific reports, 5. Article number: 8256(2015), doi: 10.1038/srep08256 http://www.nature.com/articles/srep08256#t1

[168] Rashid, T., Kobayashi, T., & Nakauchi, H. (2014). Revisiting the flight of Icarus: making human organs from PSCs with large animal chimeras. Cell Stem Cell,15(4), 406-409.

[169] Feng, W., Dai, Y., Mou, L., Cooper, D. K., Shi, D., & Cai, Z. (2015). The potential of the combination of CRISPR/Cas9 and pluripotent stem cells to provide human organs from chimaeric pigs. International journal of molecular sciences, 16(3), 6545-6556. doi:10.3390/ijms16036545 http://www.mdpi.com/1422-0067/16/3/6545/htm#fig_body_display_ijms-16-06545-f003

[170] Wu, J., Platero Luengo, A., Gil, M. A., Suzuki, K., Cuello, C., Morales Valencia, M., … & Martinez, E. A. , Izpisua Belmonte J.C. (2016). Generation of human organs in pigs via interspecies blastocyst complementation. Reproduction in Domestic Animals, 51(S2), 18-24. DOI: 10.1111/rda.12796 http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/rda.12796/full

Дмитрий Джагаров — специально для RLEGroup